Способы приготовления микропрепаратов. Приготовление микроскопических препаратов Подготовка препаратов для микроскопа

Практические занятия биологией основаны на исследованиях при помощи наблюдательной оптики объектов живой природы и их взаимосвязей с окружающей средой. Для осуществления этих целей необходимо сделать препараты для микроскопа . Они являются неотъемлемой частью процесса изучения микромира, наглядно показывают строение микроорганизмов на клеточном уровне. Микропрепаратом называется подготовленная для просмотра в увеличительный прибор ткань животного происхождения, а также невидимый невооруженным глазом организм или их колония, помещенная в питательный субстрат.

Чтобы сделать препарат для микроскопа в домашних условиях, понадобятся специальные стекла со стандартизированными размерами, используемые в медицине и научной деятельности:

Способы склеивания стеклышек:

Тончайшие срезы

Чтобы сделать препарат из биологической ткани применяется устройство, называемое микротом. В любительской микроскопии от реализован просто: в круглой пластиковой формочке, напоминающей колесо, размещено лезвие. Внутрь колесика, в отверстие, просовывается кусочек биоткани. Поворотом выпирающей рукоятки получается поперечный или продольный срез не более 40-50 микрометров, для последующего рассматривания на увеличении 40-640 крат.

Подкрашивание

Целесообразно для контрастирования и четкой детализации картинки при микроскопировании. Можно приготовить классический раствор Люголя: калиевую соль, состоящую из бесцветных кристаллов, растворяют с йодом в воде в пропорции: 5:10:85. Еще в качестве красителей можно брать зеленку, марганец, метиловый синий, красно-коричневый порошок эозин. Прокрашивание осуществляется путем смачивания концентрированным цветным веществом или его нанесением ватной палочкой.

Долгосрочное хранение

Препарат будет долговечным, если при приготовлении использовать фиксирующую жидкость. Ее действие заключается в том, что полностью останавливается жизнеспособность органоидов изучаемого микрообразца. Продолжительность консервации от 10-15 минут до часа. Хорошо зарекомендовали себя этиловый спирт и формидрон, содержащий формалин. При работе с фиксаторами не допускайте их попадания на открытые участки кожи.

С готовыми комплектами микропрепаратов можно ознакомиться в каталоге интернет-магазина. А в разделе статей и обзоров на нашем сайте вы найдете дополнительную информацию по приготовлению препаратов для микроскопа в домашних условиях: висячая или раздавленная капля, фиксированный мазок, отпечаток и многое другое.

Для приготовления временных микропрепаратов необходимо иметь набор предметных и покровных стекол, препаровальные иглы, бритвы, скальпели, стеклянные палочки для воды, пинцеты, фильтровальную бумагу, некоторые реактивы.

Предметное и покровное стекла промывают водой и протирают досуха мягкой тряпочкой. Тонкий срез растительного объекта помещают в каплю воды на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Если жидкость на препарате выступает за края покровного стекла, то излишек ее удаляют полосками фильтровальной бумаги. Если вода не покрывает всю площадь под покровным стеклом, пипеткой наносят близ края покровного стекла еще каплю, которая сама втягивается под стекло.

При необходимости введения какого-либо красящего реактива воду из-под покровного стекла отсасывают с помощью фильтровальной бумаги, а капельку реактива наносят с противоположной стороны в край покровного стекла.

Красящими реактивами могут быть следующие вещества:

1) йод, растворенный в йодиде калия (для окрашивания зерен крахмала в клетках);

2) хлор-цинк-йод (для окрашивания целлюлозных клеточных оболочек);

3) флороглюцин и соляная кислота (для окрашивания одревесневших оболочек);

4) фуксин (для окрашивания цитоплазмы);

5) гематоксилин (для окрашивания ядер);

6) глицерин (для просветления препарата).

Клетка – основная структурная и функциональная единица тела растения. У одноклеточных растений клетка функционирует как целый организм, у многоклеточных организмов наблюдается дифференциация клеток. Поэтому размеры, форма и строение клеток у таких организмов весьма разнообразны. Взрослая живая растительная клетка состоит из протопласта, окруженного клеточной оболочкой и содержащего неживые включения (запасные вещества и конечные продукты метаболизма).

Протопласт – живое содержимое клетки – состоит из органоидов, или органелл, окруженных гиалоплазмой. Органеллы можно разделить на три группы: двумембранные – ядро, пластиды, митохондрии; одномембранные – эндоплазматический ретикулум (эндоплазматическая сеть – ЭПС), аппарат (комплекс) Гольджи, вакуоль, лизосомы, плазмалемма; немембранные – рибосомы, микротрубочки, микрофиламенты. Гиалоплазма представляет собой непрерывную коллоидную фазу клетки, обладающую определенной вязкостью. Она окружает все органеллы и обеспечивает их взаимодействие. Гиалоплазму с органеллами, за вычетом ядра и пластид, называют цитоплазмой .

Ядро – обязательная часть эукариотической клетки. Это место хранения и воспроизведения наследственной информации. Ядро также служит центром управления обменом веществ и почти всех процессов, происходящих в клетке. Снаружи ядро покрыто двойной мембраной – ядерной оболочкой, пронизанной порами, на краях которых наружная мембрана переходит во внутреннюю. Внутреннее содержимое ядра – кариоплазма с погруженными в нее хроматином и ядрышками, и рибосомами.

Митохондрии – присутствуют во всех живых эукариотических клетках. Их внутренняя мембрана образует выросты в полость митохондрии в виде пластин или трубок, называемые кристами. Пространство между кристами заполнено однородным матриксом. В матриксе встречаются рибосомы и собственная ДНК. Основная функция митохондрий – обеспечение энергетических потребностей клетки путем дыхания.

Пластиды – органеллы, встречающиеся только в растительной клетке. Они представлены хлоропластами (зеленые), хромопластами (желтые, оранжевые, красно-оранжевые) и лейкопластами (бесцветные). Хлоропласты имеют двумемранную оболочку. Внутренняя мембрана вдается в полость хлоропласта немногочисленными выростами. Между выростами находится строма. Выросты и строма формируют в полости хлоропласта сложную систему мембранных поверхностей, отграничивающих особые плоские мешки, называемые тилакоидами или ламеллами. Тиллакоиды образуют стопки – граны . В мембранах тилакоидов сосредоточен главнейший пигмент зеленых растений – хлорофилл и вспомогательные пигменты – каротиноиды.

Эндоплазматическая сеть – трехмерная система вакуолей и канальцев, имеющая форму плоских мешочков или цистерн. Шероховатая ЭПС является местом синтеза белка и покрыта многочисленными рибосомами. Гладкая ЭПС лишена рибосом и служит местом образования липидов.

Вакуоли – полости в протопласте эукариотических клеток. Вакуоли – это производные ЭПС, ограниченные мембраной – тонопластом и заполненные водянистым содержимым – клеточным соком. В молодых растительных клетках вакуоли представляют сиситему канальцев и пузырьков (провакуоли), по мере роста клеток они увеличиваются и сливаются в одну большую вакуоль. Она занимает 70-90% объема клетки, а протопласт располагается в виде тонкого постенного слоя. В основном увеличение размеров клетки
происходит за счет роста вакуоли. В результате возникает тургорное давление и поддерживается упругость клеток и тканей.

Клеточный сок представляет собой водный раствор минеральных солей и различных органических соединений: углеводов (моно-, ди- и полисахариды), белков, органических кислот и их солей (наиболее часто встречаются лимонная, яблочная, янтарная, щавелевая кислоты и их производные), алкалоидов (азотсодержащие соединения, многие из которых – растительные яды, некоторые используются человеком – кофеин, атропин, хинин, морфин, кодеин), танинов (фенольные производные), гликозидов (производные cахаров). Среди последних наиболее интересна группа флавоноидов (это пигменты двух основных цветов: флавоны – желтые и антоцианы – красно-фиолетовые). Наиболее часто флавоноиды содержатся в клетках околоцветника цветков, которым они придают разнообразную окраску. Интересно, что антоцианы способны изменять цвет в зависимости от реакции клеточного сока: при слабокислой – красные, а при нейтральной или основной – сине-фиолетовые. Изменение окраски антоцианов можно наблюдать при раскрывании цветков незабудки, медуницы или окопника шероховатого. У бутонов этих растений венчики розовые, а у раскрывшихся цветков – синие или фиолетовые. Помимо лепестков антоцианы могут содержаться в других частях растения – листьях, стеблях, корнях, придавая им характерный цвет.

Аппарат Гольджи состоит из отдельных диктиосом и пузырьков Гольджи. Диктиосомы – стопки плоских, не соприкасающихся друг с другом дисковидных цистерн, ограниченных мембранами. Пузырьки Гольджи отчленяются от краев диктиосомных пластинок или концов трубок и направляются в сторону плазмалеммы или вакуоли. Пузырьки Гольджи транспортируют образовавшиеся полисахариды.

Окраска по Граму.

1 этап - приготовление мазка.

Предметное стекло обжигают в пламени газовой горелки. Восковым карандашом отмечают пределы будущего мазка в виде окружности диаметром 1-2 см. и кладут стекло на стол. Прокаленной петлёй наносят в середину кружка небольшую каплю стерильного изотонического раствора хлорида натрия (ИХН). Затем в эту каплю вносят небольшое количество культуры бактерий, тщательно эмульгируют и распределяют тонким слоем в пределах кружка. Мазки из бульонных культур готовят без предварительного нанесения ИХН.

2 этап - высушивание.

Стекло оставляют на воздухе до исчезновения влаги.

3 этап - фиксация.

Фиксацию проводят для того, чтобы убить микробы, прикрепить их к стеклу, повысить их восприимчивость к красителям. Для фиксации предметное стекло (мазком вверх) трижды накладывают на пламя горелки на 2-3 секунды с интервалом 4-6 секунд. Мазки из гноя, крови, мокроты, отечной жидкости фиксируют погружением в фиксирующие жидкости (ацетон, смесь Никифорова). Такая фиксация позволяет избежать грубых деформаций объекта исследования.

4 этап - окраска.

Различают простые и сложные (дифференцирующие) способы окраски. Простые способы позволяют судить о величине, форме, локализации и взаимном расположении клеток. Сложные способы позволяют установить структуру микробов и часто их неодинаковое отношение к красителям. Примером простых способов может служить окраска фуксином (1-2 минуты), метиленовым синим или кристаллвиолетом (3-5 минут), а сложных - окраска по Граму, Романовскому-Гимзе, Циль-Нильсену.

Дифференцирующий метод Грама

После окраски этим методом одни бактерии, окрашиваются в темно-фиолетовый цвет (грамположительные, Гр+). другие - в бордово-красный (грамотрицательные, Гр-). Сущность этого способа окраски состоит в том, что Гр+ бактерии прочно фиксируют комплекс из генцианвиолета и йода, не обесцвечиваясь этанолом. Гр- бактерии после обесцвечивания докрашивают фуксином.

Этапы окраски по Грамму

Микроскоп.

В этой статье расскажу 3 способа приготовления препаратов для микроскопа. Эти способы - самые простые.

В начале статьи - так называемый словарик, а точнее пояснения, что такое тот или иной предмет.

Для изготовления микропрепаратов требуется специальный инструмент, красители, а также определенная аккуратность и сноровка. Очень важно строгое соблюдение всех необходимых условий – иначе микропрепарат может оказаться непригодным для исследований.

В продаже есть готовые наборы препаратов для исследований (что удобно для дома и школы) - например, 25 препаратов , или 38 слайдов от Левенгук . А также минералы и другие наборы.

пояснения

Фиксированный препарат - в микробиологии часто готовят именно фиксированные препараты, так что следует знать, что это такое. Эти препараты рассматривают под микроскопом именно в окрашенном виде. Под словом "фиксация" имеется ввиду такая обработка живого объекта (который вы собираетесь рассмотреть), которая дает возможность быстро прервать жизненные процессы в том или ином объекте (поясню проще - убить), при этом сохранив тонкую структуру. В результате фиксации клетки прочно прикрепляются к стеклу и лучше прокрашиваются. Фиксация необходима в случае работы с патогенными микроорганизмами (в целях самобезопасности).

Суспензия - смесь каких-либо веществ, где твёрдое вещество распределено в виде мельчайших частиц в жидком веществе в неосевшем состоянии.

Биологическая петля - тонкая металлическая палочка, на конце - тонкая металлическая петля. Используется для захватывания маленького количества той или иной суспензии микроорганизмов.

Вазелин - мазеобразная жидкость без запаха и вкуса. Смесь состоит из минерального масла и твёрдых парафинов (воскоподобная смесь).

Герметизация - обеспечение совершенной непроницаемости для разных газов и жидкостей поверхностей и мест соединения деталей.

Агар-агар - в микробиологии используется для изготовления плотных и полужидких питательных сред, то есть агаризованных сред.

Жидкость Карнуа - жидкость для фиксации.

Горелка - устройство, имеющее инжектор, который установлен в металлической трубке с отверстиями для поступления в эту трубку атмосферного воздуха, которая закреплена на подставке с боковым вводом для подачи в трубку газа, при этом отверстия выполнены на боковой поверхности трубки, на которой для изменения подачи воздуха в горелку, может быть установлена подвижная заслонка, изменяющая площадь проходного сечения этих отверстий.

Смесь Никифорова - смесь равных объемов этилового спирта и безводного серного эфира, применяется для фиксации мазков крови, мазков-отпечатков органов и каких либо тканей.

Приготовления препарата "раздавленная капля"

Приготовление препарата "висячая капля"

Висячая капля.

Одну каплю суспензии микроорганизмов (заранее приготовленной) с помощью биологической петли аккуратно нанесите на чистое покровное стекло.
Переверните покровное стекло с каплей суспензии так, чтобы капля свободно висела.
Поместите перевёрнутое покровное стекло с каплей над лункой специального покровного стекла с углублением в центре.
Капля не должна касаться краёв стекла и углубления (лунки), она должна свободно висеть на покровном стекле.
Края углубления специального покровного стекла предварительно смазывают вазелином для герметизации камеры.
Наслаждайтесь наблюдением за бактериями в микропрепарате!

Приготовление препарата "отпечаток"

Из агаризованной среды, на которой какие-либо микроорганизмы растут абсолютным сплошным газоном или же в виде отдельных колоний, аккуратно вырежете скальпелем не очень большой кубик.

Перенесите его на предметное стекло таким образом, чтобы поверхность кубика с микроорганизмами была обращена именно вверх.

Затем к газону микроорганизмов или к колонии приложите обычное покровное стекло (абсолютно чистое), аккуратно и не сильно, а слегка, надавите на него биологической петлей или пинцетом и тотчас снимите, стараясь не сдвинуть его в сторону.

Полученный препарат (покровное стекло с отпечатком) помещают именно отпечатком вниз в каплю обычной воды на чистое предметное стекло. Отпечаток также можно получить и на предметном стекле, если касаться поверхности колонии предметным стеклом.

Препарат готов!
Внимание! Препараты живых клеток рассматривают с помощью "сухих систем" микроскопа. После микроскопирования такие препараты перед мытьем должны быть выдержаны в дезрастворе (дезинфицирующее средство).

Приготовление препарата "отпечаток", иной способ

Приготовление препарата "фиксированный мазок"

Для того, чтобы приготовить этот препарат, требуется на обезжиренное предметное стекло нанести одну каплю воды.

В неё биологической петлей внесите исследуемый вами материал и распределите его так, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром примерно 1-1,5 сантиметра (только при таком распределении материала в мазке можно увидеть изолированные бактериальные клетки).

Если исследуемый материал содержится в жидкой среде, то петлей его непосредственно наносят на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки.

Для фиксации мазка предметное стекло (именно мазком вверх) очень аккуратно и медленно проводят 3 раза (в течение всего 3 секунд) через пламя горелки. Микроорганизмы, находящиеся в мазке, при фиксации погибают, плотно прикрепляясь к поверхности предметного стекла, и они не смываются при дальнейшей обработке препарата.

Готово!

Внимание! Более долгое нагревание может вызвать деформацию структур клеток. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и каких-либо тканей и (в некоторых случаях и мазки из культур), фиксируют погружением на 5-20 минут в метиловый синий или этиловый спирт, смесь Никифорова, также сулемовый спирт или иные фиксирующие жидкости.

Примеры микропрепаратов для микроскопа

Ботаника и зоология:

Кожица лука
Зерновка ржи
Корневой чехлик
Ветка липы
Пыльник
Завязь
Камелия
Эпидермис листа герани
Конечность пчелы
Крыло пчелы
Циклоп
Вольвокс
Эвглена
Инфузория-туфелька
Дождевой червь (поперечный срез)
Ротовой аппарат комара
Аскарида
Дафнии

Биология и физиология:

Мутация дрозофилы (бескрылая форма)
Мутация дрозофилы (черное тело)
Дрозофила "норма"
Животная клетка
Растительная клетка
Плесень мукор
Дробление яйцеклетки
Митоз в корешке лука
Поперечно-полосатые мышцы
Сперматазоиды млекопитающего
Нерв (поперечный срез)
Рыхлая соединительная ткань
Яйцеклетка млекопитающего
Нервные клетки
Гиалиновый хрящ
Гладкие мышцы
Костная ткань
Кровь лягушки
Кровь человека
Однослойный эпителий

Материалы. Листья традесканции виргинской (Tradescantia virginica ), подсолнечника (Helianthus annuus ); тычинки из цветков мальвы (Malva sp .), зафиксированные в 90-96%-ном спирте; комплект постоянных микропрепаратов "Анатомия растений"; лактофенол, сернокислый анилин.

Для изучения растительных объектов с помощью светового микроскопа необходимо приготовить микропрепарат. Микропрепараты, не предназначенные для длительного хранения, называются временными . Изучаемый объект помещают на предметное стекло в каплю воды, глицерина, раствора, реактива или красителя и накрывают покровным стеклом. Такие препараты можно хранить в течение нескольких дней, поместив во влажную атмосферу.

Если объекты помещают в бальзам, глицерин с желатиной или целлоидин, препараты сохраняются годами и называются постоянными .

Некоторые растения или их органы (водоросли, споры, пыльца и др.) можно рассматривать под микроскопом целиком, без предварительного изготовления срезов. Такие препараты называются тотальными .

Однако число объектов, которые можно изучать на тотальных микропрепаратах невелико. Чаще приходится делать срезы органов, подлежащих изучению. Срезы изготавливают из свежих или фиксированных частей растений. Обычно для фиксации употребляют растворы спирта или формалина. Сделанные срезы должны быть очень тонкими и прозрачными. Различают следующие виды срезов: поперечный и продольный (радиальный , тангентальный , парадермальный ) (рис. 2, Б).

Поперечный срез проходит перпендикулярно оси органа и позволяет изучить строение органа в поперечном сечении.

Продольный радиальный срез проходит по радиусу оси органа и дает возможность изучить строение органа в продольном сечении.

Продольный тангентальный срез проходит перпендикулярно радиусу цилиндрической структуры, например, корня или стебля; в случае вторичных ксилемы и флоэмы проходит под прямым углом к сердцевинным лучам.

Парадермальный срез (греч. пара + дерма - кожа) - сечение, параллельное поверхности плоской структуры, например, листа (срез эпидермы листа).

Правила изготовления анатомических срезов

Для приготовления временных микропрепаратов необходимо иметь набор предметных и покровных стекол, препаровальные иглы, пипетку, безопасную бритву, скальпель, стеклянную палочку, фильтровальную бумагу, реактивы.

При изготовлении временных микропрепаратов необходимо соблюдать следующую последовательность операций:

Вымыть и тщательно вытереть предметное и покровное стекла. Чтобы не сломать очень хрупкое покровное стекло, надо поместить его в складку салфетки между большим и указательным пальцами правой руки и осторожно вытереть его круговыми движениями пальцев;

Нанести на предметное стекло пипеткой каплю жидкости (воды, глицерина, раствора, реактива или красителя);

Сделать срез изучаемого органа при помощи лезвия. Лезвие должно быть очень острым. Для изготовления срезов, мелкие объекты поместить между кусочками из сердцевины бузины или пенопласта (рис. 2, А). Лезвием выровнить верхнюю поверхность пенопласта вместе с объектом. Затем сделать тонкий срез, ведя лезвием к себе наискось одним плавным и быстрым движением. При этом объект держать строго вертикально, а лезвие - строго горизонтально. Обе руки должны быть совершенно свободны. Не следует ими опираться на стол или прижимать к груди (рис. 3). Сделать сразу несколько срезов. Лезвие и объект все время смачивать.

Выбрать самый тонкий срез, перенести его с помощью препаровальной иглы или тонкой кисточки в центр предметного стекла в каплю жидкости;

Закрыть срез покровным стеклом так, чтобы под него не попал воздух. Для этого покровное стекло взять двумя пальцами за грани и подвести под углом нижнюю грань к краю капли жидкости и плавно его опустить;

Если жидкости много, и она вытекает из-под покровного стекла, удалить ее при помощи фильтровальной бумаги. Если же под покровным стеклом остались места, заполненные воздухом, то добавить жидкость, поместив ее каплю рядом с краем покровного стекла, а с противоположной стороны фильтровальную бумагу.

Рис. 2. Закладка объекта в сердцевину бузины(А) и сечения цилиндрического органа (Б):

1 - поперечное, 2 - продольное радиальное, 3 - продольное тангентальное.

Рис. 3. Положение рук при изготовлении среза.

При необходимости окрашивания препарата реактивом воду из-под покровного стекла отсасывают с помощью фильтровальной бумаги, а капельку реактива наносят с противоположной стороны на край покровного стекла. Реактивами, часто используемыми при окраске растительных препаратов, являются такие:

Йод, растворенный в йодиде калия (для окрашивания крахмальных зерен);

Фуксин (для окрашивания цитоплазмы);

Гематоксилин (для окрашивания ядер);

Хлор-цинк-йод (для окрашивания целлюлозных клеточных оболочек);

Флороглюцин и соляная кислота (для окрашивания одревесневших оболочек);

Глицерин (для просветления препарата) и др.

Ход работы

Задание 1. Приготовить 2 тотальных микропрепарата пыльцы мальвы (Malva sp .): пыльца в воздухе (без покровного стекла) и в лактофеноле. Рассмотреть оба препарата при малом увеличении, отметив особенности сред, в которые помещены пыльцевые зерна. Исследовать строение пыльцы при большом увеличении микроскопа. Сделать рисунок.

Последовательность работы. На середину предметного стекла пипеткой нанести каплю спирта с пыльцой. После высыхания спирта, препарат положить на предметный столик микроскопа и рассмотреть пыльцевые зерна в окружении воздуха. Показатели преломления стекла, воздуха и пыльцы существенно различаются. Поэтому в воздушной среде видны лишь грубые и сильно затемненные элементы структуры. Чтобы избежать не желательных оптических явлений, надо рассмотреть пыльцу в среде, показатель преломления которой близок к показателю преломления стекла. Такой средой служит лактофенол. Стеклянной палочкой на объект нанести каплю лактофенола, затем накрыть его покровным стеклом.

Готовый микропрепарат поместить на предметный столик и исследовать. При малом увеличении видны крупные шаровидные пыльцевые зерна с шиповидными выростами на поверхности (рис. 4). При большом увеличении и перемещении тубуса с помощью микрометренного винта пыльцевые зерна рассмотреть в разных плоскостях: то с поверхности, то в оптическом разрезе. На поверхности пыльцевого зерна хорошо видны выросты стенки. Ближе к периферии они кажутся удлиненными и заостренными, ближе к центру - более шаровидными, а в проекции они имеют вид небольших окружностей. Кроме выростов, на поверхности расположены ростковые поры, через которые в период прорастания пыльцы выходят пыльцевые трубки.

Слегка опустить тубус с помощью микрометренного винта и рассмотреть густое темное внутреннее содержимое (которое отстало от стенки вследствие обезвоживания его спиртом) и две стенки: внутреннюю тонкую - интину и наружную толстую с шаровидными выростами - экзину . После детального исследования при большом увеличении зарисовать одно пыльцевое зерно и обозначить экзину, шиповидные выросты, ростковую пору, интину, внутреннее содержимое.

Рис. 4. Пыльцевое зерно мальвы (Malva sp .) (часть зерна в оптическом разрезе):

1 - экзина, 2 - шиповидный вырост, 3 - ростковая пора (вид сверху), 4 - ростковая пора (вид сбоку), 5 - интина, 6 - внутреннее содержимое.

Задание 2. Приготовить временный препарат парадермального среза эпидермы с нижней стороны листа традесканции виргинской (Tradescantia virginica ) в капле воды, и рассмотреть его под микроскопом.

Последовательность работы. Для изготовления препарата лист традесканции обвернуть вокруг указательного пальца левой руки так, чтобы нижняя сторона фиолетового цвета была обращена наружу. Правой рукой при помощи препаровальной иглы надорвать эпидерму над средней жилкой в средней части листа и пинцетом снять ее кусочек. При этом невольно захватывается и часть мякоти листа (мезофилла), но обычно можно найти тонкий участок на периферии, состоящий из одного ряда клеток эпидермы. Сорванный кусочек положить на предметное стекло в каплю воды наружной стороной вверх и накрыть покровным стеклом. При малом увеличении рассмотреть вытянутые клетки в виде шестиугольников, бесцветные или окрашенные в бледно-фиолетовый цвет благодаря присутствию в вакуолях пигмента антоциана.

Задание 3. Научиться изготовлять разные виды срезов (поперечный, продольный радиальный, продольный тангентальный) из стебля подсолнечника (Helianthus annuus ) и делать из них микропрепараты. Рассмотреть их под микроскопом.

Последовательность работы. Свежесрезанные или фиксированные междоузлия стебля (длиной 2 - 3 см, толщиной 7- 8 мм) разрезать вдоль на 2 части. Невооруженным глазом или с помощью лупы на поперечном сечении стебля можно выделить две зоны: наружную - неоднородную, состоящую преимущественно из плотно сомкнутых клеток, и внутреннюю - рыхлую, построенную однородно.

Поперечные срезы. С выровненной поверхности одной из половинок сделать лезвием несколько поперечных срезов. Эти срезы должны захватить как периферическую часть, так и часть рыхлой сердцевины. С помощью препаровальной иглы или кисточки срез поместить в центр предметного стекла, окрасить его раствором сернокислого анилина, накрыть покровным стеклом и рассмотреть под микроскопом.

Продольные срезы. Для изготовления продольного радиального среза разрезать вдоль кусочек стебля подсолнечника так, чтобы разрез прошел через середину одного из крупных пучков, и с полученного радиального разреза сделать лезвием несколько тонких срезов. Срез поместить на предметное стекло, окрасить сернокислым анилином, накрыть покровным стеклом и рассмотреть под микроскопом.

Для изготовления продольного тангентального среза разрезать кусочек стебля подсолнечника перпендикулярно радиусу стебля, так чтобы он проходил под прямым углом к сердцевинным лучам. Произвести его окрашивание сернокислым анилином.

Одревесневшие оболочки клеток окрасятся в лимонно-желтый цвет.

Задание 4. Рассмотреть несколько постоянных микропрепаратов из комплекта "Анатомия растений". Сравнить временные и постоянные микропрепараты стебля подсолнечника.